? ? ?? 來(lái)源：華人抗體

? ? ?? 近年來(lái)，雙特異性抗體基于更為全面藥物機(jī)理，顯示更強(qiáng)臨床及市場(chǎng)前面，成為全球抗體藥物的關(guān)注的熱點(diǎn)。目前全球已批準(zhǔn)3個(gè)雙特異性抗體藥物（一個(gè)退市），截止到2019年底約有85個(gè)項(xiàng)目處于臨床階段，120個(gè)左右的項(xiàng)目處于臨床前。

? ? ?? 按治療領(lǐng)域分類，75%左右的雙抗項(xiàng)目為抗腫瘤藥物，以CD3相關(guān)的雙特異性抗體達(dá)到了158個(gè)，占到一半以上。雙抗藥物是眾所周知的開(kāi)發(fā)難度大，而CD3雙抗則是目前臨床階段轉(zhuǎn)化最為成功的雙抗藥物，甚至直接叫板CAR-T療法。

? ? ?? 2019年6月14日，再生元公布CD3/CD20雙特異性抗體REGN1979一期臨床結(jié)果：在14個(gè)患者中，濾泡淋巴瘤FL患者（5mg以上劑量）總響應(yīng)率ORR為93%，完全緩解率CR為71%；彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤DLBCL患者(80mg以上劑量）總響應(yīng)率為57%（4/7），且均為完全緩解，其中2例為經(jīng)CAR-T療法治療失敗的患者。

? ? ?? 2019年12月8日，羅氏在ASH會(huì)上公布了2款CD3/CD20雙抗治療復(fù)發(fā)或難治B細(xì)胞NHL的良好療效，在CAR-T治療無(wú)效的患者中也能夠產(chǎn)生緩解。在曾經(jīng)接受過(guò)CAR-T療法的患者中，ORR為38.9%（n=7/18），CR為22.2%（n=4/18）。

? ? ?? 2019年ASH期間，基于多個(gè)CD3雙抗的顯著進(jìn)展，甚至有人提出可以忘記CAR-T藥物研發(fā)的論斷了。然而對(duì)于CD3雙抗來(lái)說(shuō)，雖然開(kāi)發(fā)有所突破，但也有難度，仍然在摸索中前線。

CD3雙抗的研究熱點(diǎn)
? ? ?? 目前CD3雙抗的研發(fā)主要集在CD3抗體本身的優(yōu)化，對(duì)于其種屬相關(guān)性、親和力和價(jià)鍵方面進(jìn)行了諸多探索，對(duì)于與療效和副作用進(jìn)行了充分平衡。

? ? ?? CD3抗體對(duì)CD3復(fù)合體ε鏈的親和力是BsTCEs是否成功的首個(gè)關(guān)鍵因素，這一點(diǎn)已經(jīng)達(dá)成行業(yè)內(nèi)共識(shí)，維持在1-100nM范圍內(nèi)為最佳。一方面是由于，為了模擬出T細(xì)胞的激活作用，CD3抗體需要相對(duì)低的親和力，較高的Koff值。因?yàn)門(mén)細(xì)胞在體細(xì)胞的激活過(guò)程中，是依靠于T細(xì)胞的反復(fù)結(jié)合進(jìn)行瀑布效應(yīng)，形成成簇的T細(xì)胞，指數(shù)式地帶動(dòng)下游信號(hào)通路的變化。如果CD3抗體的親和力過(guò)高，則只會(huì)與T細(xì)胞形成1:1的結(jié)合，很難引起群體T細(xì)胞的殺傷作用。另一方面則與組織分布有關(guān)，過(guò)高親和力的CD3抗體可能將把雙抗限制在脾臟等部位，難以接觸到腫瘤。

▲CD3雙抗藥物機(jī)理

? ? ?? CD3單抗的種屬相關(guān)性對(duì)CD3雙抗的開(kāi)發(fā)極為關(guān)鍵，SP34是目前為數(shù)不多公開(kāi)的可以和猴子具有種屬反應(yīng)的CD3抗體?；谶@些因素大型藥企及雙抗平臺(tái)型企業(yè)均開(kāi)發(fā)了自主的CD3抗體，近年來(lái)閃亮登場(chǎng)的WuXibody就擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)可以和猴子具有種屬反應(yīng)的CD3抗體。

? ? ?? CD3價(jià)鍵對(duì)于雙抗功能也具有重要影響，在研BsTCEs單價(jià)CD3形式多價(jià)形式的。這主要是在之前的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)多價(jià)形式的CD3雙抗可能會(huì)引起活化誘導(dǎo)T細(xì)胞死亡（AICD），造成非靶點(diǎn)依賴的T細(xì)胞激活，在沒(méi)有結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原情況激活T細(xì)胞引起副反應(yīng)。CD3價(jià)鍵同樣對(duì)于CD3抗體親和力息息相關(guān)，對(duì)于單價(jià)CD3抗體而言，如上所述通常需要低親和力的CD3抗體。而對(duì)于多價(jià)形式，則需要對(duì)腫瘤相關(guān)抗原具有高親和力。

CD28為CD3雙抗注入活力
? ? ?? 基于以上對(duì)于CD3雙抗的研發(fā)方面，是否能否從其他方面取得突破，賽諾菲首先給出了答案。2019年11月18日，在Nature cancer上的一篇報(bào)道，來(lái)自賽諾菲的研發(fā)者們通過(guò)CD3雙抗聯(lián)合CD28的三特異性抗體療法，在抗腫瘤研發(fā)取得突破進(jìn)展。

? ? ?? 在T細(xì)胞的激活過(guò)程中，需要TCR/CD3結(jié)合到MHC-多肽，同時(shí)需要第二重共刺激信號(hào)進(jìn)一步激活。因而在CD3雙抗基礎(chǔ)上，激活CD28有望進(jìn)一步提升抗腫瘤活性。賽諾菲因此傳統(tǒng)CD3雙抗的基礎(chǔ)上加入CD28，形成同時(shí)靶向CD38/CD3/CD28的三特異性抗體。

▲CD28三特異性抗體設(shè)計(jì)原理

? ? ?? 從功能上來(lái)看，三特異性抗體分工明確。CD38為腫瘤表面抗原，其也可以是其他腫瘤相關(guān)抗原，用于特異性識(shí)別識(shí)別腫瘤細(xì)胞；CD3作為T(mén)細(xì)胞共受體，用于激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞和T輔助細(xì)胞，并介導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞特異性殺傷；CD28分子則是TCR/CD3復(fù)合物的共刺激分子，促進(jìn)T細(xì)胞活化，且這種增強(qiáng)的T細(xì)胞活化驅(qū)動(dòng)了T細(xì)胞的增殖以及T細(xì)胞中抗凋亡蛋白Bcl-xL的表達(dá)。

▲基于CODV技術(shù)的三特性抗體

? ? ?? 在具體的分子結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)上，其一側(cè)的N端為靶向腫瘤抗原的Fab，另一側(cè)的設(shè)計(jì)則是通過(guò)CODV（cross-over dual variable ）雙抗技術(shù)平臺(tái)同時(shí)靶向CD3/CD28。CODV雙抗平臺(tái)技術(shù)最早見(jiàn)于賽諾菲在2016年在mabs上所發(fā)表文章，經(jīng)過(guò)不同的排列組合、篩選和評(píng)估，確定通過(guò)4個(gè)linker對(duì)VL1/VL2/VH1/VH3以及恒定區(qū)進(jìn)行串聯(lián)。該結(jié)構(gòu)能夠形成良好的空間結(jié)構(gòu)，不同靶點(diǎn)之間的識(shí)別不會(huì)相互干擾，并且具有較好的穩(wěn)定性。

? ? ?? 在CD3分子親和力的選擇上，采用了中等親和力的抗體（KD～20nM）平衡了殺傷有效性以及細(xì)胞因子大量釋放的安全性問(wèn)題。在Fc的設(shè)計(jì)上，其采用了IgG4亞型并進(jìn)行了F234A L235A (FALA) 位點(diǎn)突變，進(jìn)一步降低了與FcR的結(jié)合功能。

? ? ?? 在體內(nèi)外試驗(yàn)，三特異性抗體表現(xiàn)出非常優(yōu)異的腫瘤殺傷效果，并且在CD38低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞上也具有出色效果。更重要的是，還增強(qiáng)了T細(xì)胞在體內(nèi)外殺傷不同骨髓瘤細(xì)胞系的能力。

▲CD28三特異性抗體在體外作用

CD28是否會(huì)改變雙抗的格局？
? ? ?? 就在賽諾菲研究工作公布不久后，再生元也嘗試了CD28的三抗應(yīng)用于卵巢癌抗原MUC16和前列腺癌抗原PSMA，一時(shí)間共刺激CD28三抗似乎有望成為打破CD3雙抗格局的切入點(diǎn)。

? ? ?? CD28三抗能否異軍突起？免疫療法領(lǐng)域的大牛Carl H. June及其同事，在賽諾菲研究的同期的雜志中也進(jìn)行了觀點(diǎn)點(diǎn)評(píng)，他認(rèn)為整體上利用三特異性抗體來(lái)治療癌癥是一項(xiàng)重要進(jìn)展。作為一種靈活的技術(shù)，三特異性抗體可被用于靶向免疫調(diào)節(jié)信號(hào)的不同組合，使用這類抗體抗癌可能比多個(gè)免疫調(diào)節(jié)單抗的聯(lián)合用藥更安全、更有效。未來(lái)三特異性抗體有望為抗癌免疫治療提供一條新出路。但和CAR-T藥物類似，CD28激活后細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）帶來(lái)的安全性問(wèn)題仍需關(guān)注。同時(shí)這類分子在體內(nèi)是否會(huì)產(chǎn)生免疫原性，帶來(lái)藥物快速被清除的問(wèn)題也是未來(lái)需要探討的。

? ? ?? 在賽諾菲的研究中，當(dāng)給猴子靜脈注射三特異性抗體時(shí)，雖然出現(xiàn)了到一定程度的細(xì)胞因子相關(guān)毒性，但令人欣慰的是，包含CD28結(jié)合域的這一分子并沒(méi)有導(dǎo)致“無(wú)法應(yīng)付”的CRS。然而需要注意的，猴子中的CD38數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于多發(fā)性骨髓瘤人類患者，而更多的CD38以及更強(qiáng)的抗體介導(dǎo)的T細(xì)胞激活可能會(huì)增加人類患者的CRS風(fēng)險(xiǎn)。

? ? ?? 確實(shí)，雖然CD28助力CD3雙抗取得一定的突破，但CD28單抗的TGN1412慘案仍然歷歷在目。2005年，歐洲藥品管理局批準(zhǔn)TeGenero公司研發(fā)的一款CD28抗體TGN1412進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)。2006年3月13日，TGN1412開(kāi)始首次臨床試驗(yàn)。六名健康男性志愿者在英國(guó)北威克醫(yī)院靜脈注射了0.1 mg/kg的藥物。接下來(lái)的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)，全部志愿者都發(fā)生了嚴(yán)重的全身性炎癥反應(yīng)，被送往ICU，其中4名發(fā)生多器官衰竭。副作用來(lái)源于TGN1412誘導(dǎo)的快速和大量的釋放細(xì)胞因子。

? ? ?? 看來(lái)關(guān)于CD28三抗的研究爭(zhēng)論仍將持續(xù)，而基于聯(lián)合療法的快速興起，雙抗已經(jīng)不能滿足人們的遐想，更廣泛的三抗或者多抗療法或許正在路上了。

? ? ?? 值得注意的是，將于2020年5月3日在波士頓舉行的華人抗體協(xié)會(huì)第四屆年會(huì)中，我們將特別邀請(qǐng)到賽諾菲的首席科學(xué)官Gary J. Nabel 博士作為Keynote speaker,帶來(lái)“Tackling AIDS and Cancer with Novel Antibody Therapeutics”的演講，分享三特異性抗體在艾滋病及癌癥中的應(yīng)用進(jìn)展，詳細(xì)介紹CODV多特異性技術(shù)平臺(tái)。
Gary J Nabel?

Gary J. Nabel, M.D., PH.D.
Chief Scientific Officer & Senior VicePresident
Global Research & Development at Sanofi

? ? ?? Dr. Gary J.Nabel M.D., Ph.D. is Chief Scientific Officer, Global Research and Development,and Senior Vice President for Sanofi.? Dr. Nabel also oversees the Breakthrough Laboratory at Sanofi, which developed the first trispecific antibodies now in development for HIV, as well as, cancer immuno-therapies and novel vaccines.?
? ? ?? An author ofmore than 475 scientific publications, Dr. Nabel joined Sanofi in 2012 from the National Institutes of Health, where he served as Director of the Vaccine Research Center (VRC) since 1999, during which time, he provided overall direction and scientific leadership of the basic, clinical, and translational research activities and guided development of novel vaccine strategies against HIV, universal influenza, Ebola and emerging infectious disease viruses. His work encompasses basic mechanisms of HIV gene activation, structure-based vaccine design, and immunotherapy.
? ? ?? Dr. Nabel graduated magna cum laude from Harvard College in 1975 and continued his graduate studies at Harvard, completing his Ph.D. in 1980 and his M.D. degree two years later, followed by a post-doctoral fellowship with David Baltimore at the Whitehead Institute of MIT. In recognition of his expertise at the forefront of virology,immunology, gene therapy, and molecular biology, Dr. Nabel was elected to the National Academy of Medicine in 1998.?? Among his many other honors, Dr. Nabe lreceived the Amgen Scientific Achievement Award from the American Society for Biochemistry and Molecular Biology, the Health and Human Services Secretary’s Award for Distinguished Service, and is a fellow of the American Association of Physicians, and the American Academy of Arts Sciences.

? ? ?? 如涉及知識(shí)產(chǎn)權(quán)請(qǐng)與我司聯(lián)系

參考文獻(xiàn)
1.CODV-Ig, a universal bispecific tetravalent and multifunctional immunoglobulin format for medical applications；
2.Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptor co-stimulation；
3.Trispecific antibodies offer a third way forward for anticancer immunotherapy